Tài Liệu Kỹ Thuật Pcr

     

Kỹ thuật PCR (viết tắt của Polymerase chain reaction) là phương thức được sử dụng thoáng rộng trong xét nghiệm ADN cùng sinh học phân tử để tạo ra nhiều bản sao của một trình tự ADN cầm cố thể.

Bạn đang xem: Tài liệu kỹ thuật pcr

Thông qua PCR, một đoạn ADN cùng với lượng rất nhỏ tuổi (chỉ vài ba nanogram) rất có thể được khuếch đại theo cấp số dấn để tạo ra hàng triệu bản sao của đoạn trình từ ADN đó.

PCR hiện là 1 kỹ thuật cơ phiên bản quan trọng và thường không thể thiếu được vào quy trình nghiên cứu của những phòng phân tách về sinh học phân tử, y sinh, công nghệ hình sự, pháp y với xét nghiệm ADN.

PCR được sáng tạo bởi TS. Kary Mullis vào năm 1983. Vào thời khắc đó, ông đang thao tác làm việc tại Cetus Corporation, trong những công ty technology sinh học đầu tiên. Dự án công trình của Kary Mullis đã vinh dự được trao giải Nobel về Hóa học vào năm 1993 với Michael Smith.

Nguyên lý kỹ thuật PCR

*

PCR dựa vào việc sử dụng năng lực của enzyme DNA polymerase nhằm tổng phù hợp chuỗi ADN mới từ chuỗi ADN ban sơ được cung cấp.

Bởi vị DNA polymerase chỉ hoàn toàn có thể thêm một nucleotide vào team 3′-OH bao gồm từ trước, cần enzyme này đề nghị một đoạn ADN mồi để hoàn toàn có thể thêm nucleotide đầu tiên.

Yêu cầu này được cho phép phân định một vùng rõ ràng của chuỗi chủng loại mà nhà nghiên cứu muốn khuếch đại. Khi hoàn thành phản ứng PCR, trình tự ví dụ sẽ được tích trữ thành mặt hàng tỷ bạn dạng sao của đoạn trình từ bỏ ADN ban đầu.

Thành phần của một làm phản ứng PCR thường xuyên bao gồm:

Dung dịch ADN chủng loại (DNA template) cất đoạn ADN ví dụ đã được tinh sạch nhằm nhân bản.

Phản ứng PCR được tiến hành trong chu kỳ luân hồi nhiệt tất cả 6 cách chính:

Initialization: hỗn hợp dung dịch PCR được gia nhiệt lên tới 94–98 °C trong thời gian 1-10 phút để làm nóngDenaturation: đoạn trình từ bỏ ADN tua đôi được làm nóng cùng phân bóc tách thành 2 sợi ADN đơn, sản xuất khuôn cho quy trình nhân bảnAnnealing: các đoạn mồi dính vào sợi ADN khuôn tại vị trí mở màn để ban đầu quá trình tổng đúng theo sợi ADN mớiExtension/elongation: enzyme Taq polymerase vẫn tham gia vận động tổng hợp bằng phương pháp sử dụng các dNTPs nhằm gắn lại với nhau sản xuất thành chuỗi bổ sungFinal elongation: sau thời điểm trải sang 1 vòng lặp những chu trình nhiệt độ (25-40 vòng phụ thuộc vào thí nghiệm), bội phản ứng PCR liên tục được bảo trì ở ánh nắng mặt trời 70–74 °C trong thời gian 5-10 phút để bảo đảm rằng tổng thể các sợi ADN 1-1 sẽ được kéo dãn dài hoàn toàn. Ở thời khắc này, con số các bạn dạng sao ADN của trình từ bỏ ADN ban sơ có thể đạt đến con số 230, or 1073741824 phiên bản sao.

Xem thêm: Lý Thuyết Công Nghệ 9 Bài 1 Giới Thiệu Nghề Điện Dân Dụng, Công Nghệ 9 Bài 1: Giới Thiệu Nghề Điện Dân Dụng

Final hold: toàn bộ khay bội nghịch ứng PCR được làm mát ở ánh sáng 4–15 °C trong một khoảng thời gian không khẳng định và hoàn toàn có thể được coi như là quy trình tiến độ lưu trữ thời gian ngắn các thành phầm của bội phản ứng PCR.

Quy trình chuyên môn PCR thường thực hiện 6 thành phần cơ bản và trải qua 6 bước nêu trên.

Mặc cho dù vậy, thực tế triển khai không chỉ đơn thuần là mang mỗi yếu tắc một ít với trộn đông đảo với nhau vào ống PCR rồi cho vào máy chạy là sẽ sở hữu được hàng triệu phiên bản sao của đoạn trình tự ADN ban đầu như ước ao muốn.

Trong những phòng thử nghiệm sinh học phân tử, đặc biệt là phòng xét nghiệm ADN, mỗi phản ứng PCR cần được tối ưu hóa theo các tiêu chí của các bước để có thể nhân bản được đúng trình từ bỏ ADN mong muốn với độ tin cậy cao.

Kỹ thuật PCR với ứng dụng

Trong quãng thời hạn hơn 30 năm kể từ khi PCR được thực hiện lần đầu tiên, chuyên môn này sẽ tác động mạnh bạo đến mọi lĩnh vực chuyên ngành liên quan đến khoa học sự sống cùng Y Sinh học.

Kỹ thuật PCR đã hỗ trợ làm đổi khác cách thức phân tích và nâng cấp năng suất thao tác của các chuyên ngành từ bỏ pháp y, bình an thực phẩm, chẩn đoán lâm sàng cho đến nghiên cứu giúp hệ gen (genomics).

Trên thực tế, kỹ thuật PCR vẫn trở yêu cầu phổ biến, thỉnh thoảng hơn cả sự tưởng tượng mà bạn có thể nghĩ ra. Thuật ngữ “PCR” cũng đã là 1 từ trong Từ điển đh Merriam-Webster.

Trong nghành nghề xét nghiệm ADN, chuyên môn PCR được thực hiện để nhân bản các đoạn ADN tách bóc ra tự đứa trẻ và người cha nghi vấn. Ở bước tiếp theo, thành phầm PCR đang được dùng để phân tích trên khối hệ thống giải trình từ gen cố gắng hệ mới.

Xem thêm: Thụ Phấn Chéo Là Thụ Phấn Giữa ? A Thụ Phấn Chéo Là Sự Thụ Phấn Giữa

Tài liệu tham khảo

PCR primers (Biocompare)

TS. Đặng trần HoàngViện trưởng Viện technology ADN với Phân tích di truyền

*


Tham gia xã hội hơn 500,000 chị em bầu thân mật tới technology ADN, xét nghiệm tiết thống với xét nghiệm NIPT chọn lọc trước sinh ko xâm lấn.